蒙药肉蔻五味丸是蒙医临床上常用的蒙成药,收载于《内蒙古蒙成药标准》,由肉豆蔻、土木香、木香、广枣、筚拨五味药组成。肉蔻五味丸为黄褐色水丸,气香,味辛。主治心烦失眠,神气不宁。其中芦丁是广枣的主要成分。
1实验方法
1.1仪器与试药:LC-10ATVP高效液相色谱仪(日本岛津公司),SPD-10ATVP紫外可见分光光度检测器(日本岛津公司),N-2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所),751G型紫外一可见分光光度计,SK-2000LH(上海科导超声仪器有限公司),Satodus电子分析天平(德国Satorius公司),80-2型离心沉淀器(上海手术器械厂)。肉蔻五味丸由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提供,水为超纯水,甲醇,磷酸为色谱纯。
l.2色谱条件:色谱柱为VP-ODS(150 mmx4.6 mm),流动相为甲醇一水一磷酸(60:40:0.02,V/V),流速为0.6 ml/min,检测波长为370 nm,标样进样量为5ul,试样进样量为10ul,室温下操作。
1.3溶液的制备:①对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品0.004 30g,加甲醇适量溶解,定容制成每1 ml中含0.43mg的溶液,即得0.43 mg/ml的芦丁对照品储备液。②供试品溶液的制备:精密称取肉蔻五味丸0.2 g,置lO ml容锤瓶中.加甲醇适量,超声处理35 min,放置室温,离心沉降,取上清液。摇匀,用微孔滤膜(O.45um)滤过,即得。
2实验结果
2.1线性关系考察:取上述芦丁储备液用甲醇稀释制成8.6,17.2,25.8,34.4,43ug/ml的芦丁系列对照品溶液,备用。精密量取芦丁对照品的以上5种系列溶液各5ul,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,芦丁浓度为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程:C(浓度)=-0.1064+5.362x10-7A(峰面积),相关系数r=0.9991。芦丁在8.6~43ug/ml范围内线性关系良好。
2.2精密度试验:取对照品溶液,重复进样5次,按含量测定方法测定峰面积,测得峰面积的RSD=1.9%。
2.3 重现性试验:取同一批号的样品5份,接样品处理方法处理。在上述色谱条件下,测定。5个样品峰面积的RSD=2.1%。
2.4回收率试验:取5份已知含量(芦丁含量为0.2050 mg/g)的样品0.2g,研碎.置具塞50 ml三角烧瓶中,加甲醇10ml超声提取40min,转置25ml容量瓶中,加入芦丁的对照品溶液(高、中、低浓度)1ml,加甲醇至刻度,摇匀,按含量测定方法测定总含量,计算回收率,芦丁的平均回收率为98.4%,RSD=2.2%。
2.5样品测定:在上述色谱条件下,注入供试品溶液10ul,测定峰面积,用回归方程计算浓度,计算含量。
3讨论
3.1检测波长的选择:芦丁的最大吸收波长在240 nm和370 nm处。但在选定的色谱条件下,240 nm处被测样品的干扰峰较多,因此本文选择370 nm为芦丁的检测波长。
3.2流动相比例的选择:在本实验发现,当甲醇量比例增大时芦丁的保留时间缩短。如流动相比例为:甲醇-水-磷酸(45:55:0.02)时芦丁的保留时间为14 rain左右。最终所选比例为:甲醇-水-磷酸(60:40:0.02),此时芦丁的保留时间为4.6min,达到分离度要求。