消癌平片由乌骨藤单味药组成,具有抗癌,消炎,平喘功能。消癌平片用于
食道癌、
胃癌、
肺癌,对
大肠癌、
宫颈癌、
白血病等多种恶性
肿瘤,亦有一定疗效,亦可配合放疗、化疗及手术后治疗。消癌平片并用于治疗慢性气管炎和支气管哮喘。从目前文献报道来看,消癌平片含有多种甾体皂苷、生物碱、有机酸、多糖、树脂及色素等化学成分,且各种成分的含量均较低,活性成分亦不明确。为有效控制消癌平片的质量,选择指标性成分绿原酸作为质量控制的含量指标。方法简便、灵敏、稳定、可靠 。
建立HPLC法测定消癌平片中绿原酸含量的方法。
实验仪器与试药
岛津LC.10AT高效液相色谱仪(紫外检测器,N2000工作站,浙江大学);AS3120A超声波清洗器(天津);AE240十万分之一电子天平(瑞士),AK2140万分之一电子天平(上海奥豪斯公司)。乙腈(色谱纯),其它化学试剂均为分析纯。绿原酸对照品t购自中国药品生物制品检定所。纯度:以归一化法含量测定,对照品纯度
大于97%。
检测波长的选择采用紫外分光光度计对绿原酸对照品溶液在200~4oo nm波长范围内进行扫描,结果在327 nm波长处为最大吸收峰,因此,选定327 nm为检测波长。
系统适用性试验考察色谱柱:Diamonsil C18(4、6×150 mm,5 m);流动相i乙腈-水-磷酸(9:91-0、5);流速:1.0 ml/min;柱温:30~C;检测波长:327 nm;在上述色谱条件下,供试品中绿原酸与其它组分分离度良好,确定本品的理论板数按绿原酸峰计不得低于4000(2,3)。
线性关系考察精密称取绿原酸对照品适量,以甲醇溶解,制成浓度为0.0425 mg/ml的对照品溶液。精密吸取2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 wl注入液相色谱仪中,测定。结果以绿原酸进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,线性方程:Y=1296072X一11177,r=0.9997,线性范围:0、0850 ~0.4250 g。
供试品溶液制备取本品10片,除去包衣后,精密称定,研细,称取约1.5 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入50% 甲醇20 ml,密塞,称定重量,超声提取30 min,放冷,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,过0.45 m的滤膜,即得供试品溶液。
精密度试验精密吸取上述供试品溶液,按质量标准草案含量测定方法检验5次,每次进样10 l,测得绿原酸峰面积积分值的相对标准偏差为1、5% ,表明仪器精密度较高,可靠性强,方法可行。 ‘
稳定性试验精密吸取上述供试品溶液,在0、2?4 8 12h各进样10wl,测得绿原酸峰面积积分值的相对标准偏差为1.9% ,说明样品在12 h内稳定。
重复性试验取同一批(批号:20040401)样品粉末5份,精密称定,精密加入50% 甲醇20 ml,超声提取30 vain,按质量标准草案含量测定方法检验5次,每次进样10 l,测得结果绿原酸含量相对标准偏差为2.2% ,表明方法重复性较好。
加样回收率试验取已知含量的消癌平样品5份(批号:20040401,含量:0.2795 mg/g),每份约0、80 g,精密称定,分别精密加入对照品溶液10 ml(浓度为0.02125 mg/m1),按质量标准草案含量测定项下供试品溶液制备和含量测定方法,制备供试品溶液并进行含量测定,计算回收率,绿原酸对照品的平均回收率为98.8% ,RSD为2.1% 。说明本法回收率好,方法可行。
样品含量测定分别取3批成品,按质量标准草案含量 计,不得少于0.040 mg。通过绿原酸的含量测定,可有效控测定方法项下条件进行测定,计算。 制消癌平片的质量。
根据上述3批消癌平片试验结果,绿原酸最低含量为0.0482 me,/片,暂定本品每片含乌骨藤以绿原酸(C16H1809)。结论该法简便准确,重现性好,可作为消癌平片质量控制的依据之一。
(本文节选自《消癌平片中绿原酸的含量测定》)