为验证
通络生骨胶囊促进
骨折愈合的作用。临床试验结果显示,通络生骨胶囊可促进骨折断端血肿机化,软骨细胞增生明显,软骨骨痂出现早,骨化提前,早期形成大量新的小梁骨(编织骨),骨折局部密度增高,断端塑形改造良好,骨髓腔再通时间短。表明通络生骨胶囊可以缩短骨折愈合过程和提高骨折愈合质量。
骨折是骨科临床中最常见的病种,运用中西医结合的方法治疗骨折可以提高骨愈合率,有效减少骨科并发症,已越来越成为广大临床医师的共识。导师袁浩教授致力于中西医结合治疗骨科疾患50余年,尤其对治疗
股骨头坏死的研究有独特见解,研制生产的通络生骨胶囊经过30年的临床观察及大量实验验证,证明对股骨头坏死疾病的治疗有明显疗效。同时,在临床应用过程中还发现有一部分存在骨严重缺损和骨不易愈合的骨折病例在使用本药后,骨缺损得到了不同程度的修复,骨折也都获得了早期愈合。为了进一步验证本药在促进骨折愈合方面的作用,我们进行了如下的实验研究。
1 试验材料
1. 1 药物 ①通络生骨胶囊:由浙江海正药业股份有限公司生产,批号040401,规格为每粒0.5g,成人用量为每次4粒,每天3次;②伤科接骨片:由大连美罗中药厂有限公司生产,批号200402119;规格为每片0.35g,成人用量为每次4片,每天3次;③注射用青霉素钠:由华北制药股份有限公司提供;④速眠新Ⅱ注射液:由长春军需大学兽医研究所提供。
1. 2 仪器 ①飞利浦MD3多功能数字减影血管造影机,荷兰飞利浦公司生产,广州中医药大学第一附属医院提供;②LeicaSM2000R型平推切片机,德国莱卡仪器有限公司生产,广州中医药大学科技园提供;③光学显微镜及拍照系统,德国莱卡仪器有限公司生产,由广州中医药大学针灸实验室提供。
1. 3 动物 新西兰大白兔,普通级,10~12月龄,体重2.0~2.5kg,雌雄各半,共120只,由广州中医大学实验动物中心提供,实验动物质量合格证号SCXK(粤)200320001,动物饲料广州中医药大学实验动物中心提供标准饲料。
2 试验方法
2. 1 造模方法 选用10~12月龄2.0~2.5kg健康新西兰白兔120只,雌雄各半,随机分为5组,每组24只。适应性饲养1周后开始造模。按0.2ml•kg-1体重的速眠新给药进行麻醉,麻醉后在无菌条件下用骨锯造成兔双侧桡骨骨折模型,断端相距约1mm,缝合皮肤。随即每只动物肌肉注射青霉素钠20万U,放入笼中自然苏醒。以后每天2次,每次每只20万U肌肉注射青霉素钠以预防感染,连续注射4天。术后未发生1例感染,伤口均一期愈合。
2. 2 给药方法 造模后,进行相应的药物治疗,本试验共设通络生骨胶囊高、中、低剂量组,伤科接骨片组和模型组,见表1。按表1不同剂量设置,用蒸馏水配制相应浓度的药物混悬液,通过灌胃给药,每只兔给药容积为10ml,模型组给予等量的蒸馏水,每天1次,连续灌胃4周。
2. 3 疗效检测 第1、2、3、4周,每组每次处死6只动物,每次处死动物均按号码从大到小处死。分别作下述检查。①X线评估:造模后第1、2、3、4周,每组分别处死6只兔,取双侧前肢桡骨,将右侧桡骨剔除软组织后在飞利浦MD3多功能数字减影血管造影机下拍摄X线片,进行疗效评估,左侧桡骨留作其他试验检测用。②组织学观察:造模后第1、2、3、4周,先完成X线拍摄后,将右侧桡骨标本骨折端骨组织用10%中性甲醛固定24小时,5%的甲醛甲酸脱钙8天,石蜡包埋,切片后HE染色。
2. 4 数据处理及统计学分析所有计量资料均以均数±标准差.x±s表示。采用SPSS11.0统计软件包进行方差分析(ANOVA)。显著性检验水准取a=0.05,P<0.05则为有显著性差异。
3 结 果
3. 1 X线读片结果 第1周:骨折线清晰可见,但通络生骨胶囊高、中、低剂量组局部的血肿吸收较好,比伤科接骨片和模型组血肿面积小。第2周:骨折断端已有少量纤维连接,骨折线模糊,各组之间无明显差别。第3周:通络生骨胶囊高、中、低剂量组骨皮质连续,骨折断端呈梭形,完全看不到骨折线,而伤科接骨片组骨皮质部分连续,无明显的骨折线,模型组骨折线模糊但仍可看到不连续的骨皮质。第4周:通络生骨胶囊高、中、低剂量组的骨折已完全愈合,可见到明显的外骨痂,骨折局部密度增高,高剂量组断端的塑形改造较其他各组明显提前。伤科接骨片组骨折断端连续,有较多骨痂形成,髓腔部分再通,模型组有大量骨痂形成,断端连续,但髓腔未通,整体愈合情况不如通络生骨胶囊组和伤科接骨片组。
3. 2 X线片评分结果 第1、2周X线片无明显区别,故只对第3、4周的X线结果进行评分比较。参考上海伤科研究所制定的骨折X线评分标准〔1〕计分(见表2)。按分数编秩进行组间秩和检验,结果如表3、4所示:第3周和第4周通络生骨胶囊、伤科接骨片组与模型组比较均有显著性差异(P<0.05)。通络生骨胶囊高、中剂量组与伤科接骨片组比较有显著性差异(P<0.05)。结果说明:①从X线评估,通络生骨胶囊和伤科接骨片均能明显促进骨折动物模型的骨折愈合。②通络生骨胶囊对骨折愈合效果优于伤科接骨片。
3. 3 组织学观察 第1周时模型组以纤维骨痂为主,血肿未消;伤科接骨片组以纤维骨痂为主,血肿未消;通络生骨低剂量组以纤维骨痂为主,血肿未消;通络生骨中剂量组以纤维骨痂为主,血肿未消;通络生骨高剂量组以纤维骨痂为主,血肿吸收完全,部分见少量软骨细胞生成。第2周时模型组血肿仍未完全吸收,见少量软骨细胞生成;伤科接骨片组有少量软骨细胞生成,有类骨质和纤维骨痂;通络生骨低剂量组有软骨细胞生长,出现软骨成骨,内、外骨痂生长良好;通络生骨中剂量组有软骨细胞生长,出现软骨成骨,内骨膜成骨,细胞呈立体状,成骨活跃,骨痂生长良好;通络生骨高剂量组有大量软骨细胞生长,出现软骨成骨,内骨膜成骨,细胞呈立体状,成骨活跃,骨痂生长良好。第3周时模型组有软骨内成骨,并少量类骨质和编织骨生成;伤科接骨片组有大量软骨成骨,并有少量编织骨出现,断端内、外骨痂未连;通络生骨低剂量组软骨内成骨与编织骨并存,内、外骨痂将骨折端连接;通络生骨中剂量组大量软骨成骨与编织骨并存,以成骨细胞为主,残留部分前成骨细胞,内、外骨痂将骨折端连接;通络生骨高剂量组已完成软骨成骨。大量内、外骨痂将骨折端连接,以编织骨为主。第4周时模型组有软骨细胞生成和软骨内成骨,并见少量编织骨。断端内、外骨痂相连,但骨髓腔未再通(附图①);伤科接骨片组有大量编织骨,软骨细胞和编织骨共存,断端内、外骨痂相连,骨髓腔部分再通(附图②);通络生骨低剂量组软骨内成骨基本完成,编织骨开始塑形,骨髓腔再通(附图③);通络生骨中剂量组软骨内成骨完成,可见大量成骨细胞,编织骨开始塑形,骨髓腔再通(附图④);通络生骨高剂量组软骨内成骨完成,可见大量成骨细胞,编织骨开始塑形,骨髓腔再通(附图⑤) 。
以上组织学观察骨折愈合情况与X线的评估基本相吻合,在相同时间点上比较:①通络生骨胶囊和伤科接骨片对促进骨折愈合效果明显优于未用药的模型组。②两种药物相比较,在骨折愈合效果方面,通络生骨胶囊要优于伤科接骨片。
4 讨 论
骨折后良好的局部血液循环不仅可以提供所需的能源和营养物质,也为清除代谢废物和坏死组织提供了必要条件。骨祖细胞具有多向分化的能力〔2〕,但受局部血液供应的影响,局部血液供应好,骨原细胞就分化为成骨细胞,反之分化为成软骨细胞〔3〕。可见,成骨活动与断端局部血液供应改善程度密切相关。以往的试验证明通络生骨胶囊具有较好的改善局部血液循环的能力。对骨折端的成骨细胞的募集起到了良好的促进作用。
最能直观反映骨折愈合情况的指标是X线评估和组织学的观察,从试验结果来看,通络生骨胶囊突出表现在断端血肿机化快,软骨细胞增生明显,软骨骨痂出现早,骨化提前,早期形成大量新的小梁骨(编织骨),骨折局部密度增高,断端的塑形改造良好,骨髓腔再通。因此,通过本实验可以说明通络生骨胶囊有很好的促进骨折愈合的效果。