食道平散为中药复方制剂,主要由人参、西洋参、全蝎、蜈蚣、细辛、三七等十余种中药组成,食道平散具有益气破瘀,解毒散结等功效。食道平散用于中晚期食管癌而致食管狭窄梗阻,吞咽困难,疼痛等症。食道平散原质量标准用比色法测定人参皂苷Re的含量,其有费时.重现性差,精密度低等不足。我们参照食道平散相关文献,采用高效液相色谱法(HPI_E)对制剂中人参、西洋参、三七所含成分人参皂苷Rg。和Re进行了测定,该方法简便、快速而准确,重现性好,能更好地控制食道平散的质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器:岛津LC一10ATVP高效液相色谱仪,SPD一10AVP紫外检测器。色谱工作站。
1.2 试药:乙腈为色谱纯(美国TEDIA),其它试剂均为分析纯。人参皂苷Rgl和Re对照品(批号0703-200120和0754-9809,中国药品生物制品检定所提供.供含量测定用)。食道平散由西安金龟寿药业有限公司提供。
2 食道平散检测方法与结果
2.1 色谱条件:色谱柱:岛津VP—ODS色谱柱(150 ram~4.6mm,);流动相:乙醇5g/L:磷酸溶液(19.5:80.5);检测波长203 nm:柱温:室温;流速:1.3 ml/min。理论塔板数按人参皂苷Rgl计算应不低于5000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg。、Re对照品适掇,加甲醇制成每1 m1分别含O.5 mg、0.2 mg的溶液,即得。
2.3 线性关系考察:精密称取人参皂苷R 、Re对照品25.60mg、10.85 mg,加甲醇稀释至5 n1l,分别吸取上述溶液0.05、0.1、0.2、0.5、l。0 ml, 加甲醇定容于2 rnl容量瓶中分别吸取10ul。按上述色谱条件测定峰面积。
2.4 精密度试验:精密吸取上述对照品溶液10 l,重复进样5次,按上述色谱条件测定峰面积,结果人参皂苷Rg。和Re的峰面积中RSD分别为0.99%和2.0%。
2.5 重现性试验:取同一批号样品5份.按上述色谱条件操作,测得人参皂苷Rgl的平均含量为5.089 m#g,RSD=I.67%;人参皂苷Re的平均含量为1.321 mg/s,RSD=I.69%。
2.6 稳定性试验:取同一供试品溶液,按上述色谱条件,分别于0、1、4、8、24小时测定峰面积积分值,结果表明。供试品溶液液在24内基本稳定.其人参皂苷Rgl和Re的RSD分别为1.39%和2.52%。
2.7 回收率试验:精密称取已知含量的供试品适量,精密加入一定量的对照品,按供试品溶液制备的方法,制备待测液,按上述色谱条件操作。测定峰面积,计算舍量和回收率
2.8 食道平散样品测定:精密称取样品,按上述色谱条件操作
3 食道平散讨论
在供试品溶液制备考察时,对提取溶剂、超声次数和时问等均进行了比较实验,最终确定为减少脂溶性杂质干扰,选择乙醚回流脱脂:因西洋参、三七药材组织坚实具角质化,选择水饱和的正丁醇超声提取2次,为了避免黄酮类成分的干扰而采用碱洗的净化方法。经实验表明,该方法简便、有效,能满足含量测定的要求。
原计划含量测定时。同时测定人参皂苷Rgl、Re和Rb1三个成分,但签于三者的保留时间相差太大,目前条件所限,食道平散待今后进一步研究。