幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)感染是人类最常见的慢性感染之一,估计全球Hp感染人数超过50%[1]。Hp是一种定植于人胃黏膜并引起多种胃、十二指肠疾病的革兰阴性细菌。Hp的致病因素包括内毒素、空泡毒素、粘附素和Cag毒力岛编码的一些基因产物[2,3]。Hp感染是慢性
胃炎及
消化性溃疡的主要原因,在慢性活动性胃炎患者活检标本中Hp检出率达90%[4],在消化性溃疡患者活检标本中Hp检出率可达100%[5]。因此,慢性胃炎患者胃黏膜标本中Hp的检查,对Hp感染进行根治性治疗、彻底治愈胃炎和消化性溃疡有着重要的临床意义。
1 资料与方法
1.1 病例的选择 胃组织标本来自2003年2月~2004年8月在吉林大学中日联谊医院消化内科就诊,经胃镜活检快速尿素酶试验阳性的195例慢性胃病患者。在留取标本的当天采取外周血分别检测Hp-IgG抗体和Hp-CagA抗体。所有患者在胃镜检查前30天内未服用铋制剂、质子泵制剂、抗菌药及甾体类抗炎药物,亦无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患。
1.2 血清Hp-IgG抗体及Hp-CagA抗体的检测 空腹静脉血3ml,常温下分离血清-20℃保存。采用ELISA法检测Hp-IgG抗体及Hp-CagA抗体。试剂盒由上海生物工程公司提供。
1.3 Hp的分离培养鉴定 胃窦部及胃体部组织标本证实尿素酶阳性的前提下,胃窦部距幽门2~3cm处胃体小弯处分别钳取黏膜组织,置无菌生理盐水中4℃保存,在4h内接种SKirrow S选择性培养基中,置厌氧罐内,缓慢注入混合气体(5%O2、10%CO2、85%N2),37℃培养连续5天观察结果。Hp的鉴定依据主要包括:革兰染色阴性,外观呈S或弧形,生化反应结果为尿素酶试验阳性、触酶试验阳性和氧化酶试验阳性。
1.4 最低抑菌浓度的测定 采用平皿二倍稀释法检测接种细菌对抗生素的最低抑菌浓度。具体方法和药敏判断按NCCLS2000年的规定。标准菌株:幽门螺杆菌NCTC11637(CagA阳性)作为质控菌株。抗生素:甲硝唑、替硝唑、克拉霉素、阿莫西林、红霉素、呋喃唑酮、四环素。
2 结果
2.1 不同慢性胃病患者幽门螺杆菌分离鉴定结果 在不同类型的慢性胃病患者的胃黏膜标本中Hp的分离培养呈现较高的阳性率,且不同慢性胃病患者Hp的阳性率差异无显着性(P>0.05),见表1。表1 不同慢性胃病患者Hp分离培养结果
2.2 不同慢性胃病患者血清Hp-IgG抗体与Hp培养阳性率的关系 在195例慢性胃病患者中,165例呈现Hp-IgG抗体阳性。其Hp的阳性率达88.0%。而Hp-IgG抗体阴性患者,其Hp的阳性率仅为33.3%,两者差异有显着性(P<0.01),见表2。表2 血清Hp-IgG抗体与Hp培养阳性率的关系
2.3 不同慢性胃病患者血清Hp-CagA抗体与Hp培养阳性率的关系 在195例慢性胃病患者中,血清Hp-CagA抗体阳性为125例,其Hp的阳性率为84.4%。而Hp-CagA抗体阴性患者,其Hp的阳性率为62.5%。见表3。 表3 血清Hp-CagA抗体与Hp培养阳性率的关系
2.4 195株Hp分离株药敏试验结果 阿莫西林、克拉霉素、四环素及呋喃唑酮对Hp显示了较强的抗菌活性,红霉素较次之,甲硝唑及替硝唑对Hp的敏感性较低。见表4。表4 7种抗生素对195株Hp的药敏结果
3 讨论
Hp是革兰染色阴性的微需氧细菌,是慢性胃炎及消化性溃疡的主要病因。该项研究对195例快速尿素酶试验阳性的慢性胃病患者进行了分离培养,结果符合Hp判定标准的菌株共155株,阳性率达到79.5%。这与欧美等发达国家在90%以上的培养阳性率相比还有一定的差距,分析原因可能是在技术及方法的成熟方面相对比较落后。在比较不同胃病Hp培养阳性率发现,各种类型的慢性胃病之间无明显差异。说明Hp是引起慢性胃病不可忽视的重要因素。
目前应用于Hp诊断方法有很多种。我国1999年制定的诊断标准分为科研诊断标准及临床诊断标准。科研诊断标准要求形态学、尿素酶依赖性试验、血清学试验及特异性PCR四项中的任意两项或Hp培养阳性即可确诊。该项工作采用了Hp分离培养和血清学检测。结果表明,在Hp培养阳性的基础上,Hp-IgG抗体和Hp-CagA抗体都呈现了较高的阳性率,但单纯一项的血清学检测结果仍有阴性结果。分析原因一方面不能排除患者由于免疫力较低的因素,不能有效地产生抗体,另一方面也不能排除技术操作方面的偏差。因此,笔者认为在分离培养Hp的基础上,结合这两种血清学检测指标,以提高诊断的正确性。
随着抗生素在Hp根除治疗中的应用,Hp的耐药株也有陆续的报道,直接影响了Hp的根除效果,也是导致抗感染失败的重要原因。由于抗生素在体内易受胃内pH影响而失去活性,硝基咪唑类药物在胃内不受pH影响,已经成为治疗Hp感染的重要药物。阿莫西林及克拉霉素在胃内受pH影响较少,是根除Hp感染的重要药物,对195株Hp进行药敏分析发现,甲硝唑的MIC50已超过125μg/ml,说明敏感性很差,替硝唑的MIC50也已达到64μg/ml,敏感性亦不理想。这与国内的相关报道一致。克拉霉素是目前抗生素中对幽门螺杆菌作用最强的药物之一,该药敏试验也说明在分离的95株Hp中,克拉霉素是Hp感染根除治疗的首选药物。尽管四环素和呋喃唑酮目前在临床已经很少应用,但药敏结果提示可以作为根除Hp感染的辅助疗法。(参考来源:慢性胃炎、消化性溃疡患者幽门螺旋杆菌的分离鉴定和耐药性分析,张学英,中华医学实践杂志2006年第5卷第7期)