方法: 运用MTT法研究灵芝孢子粉水溶性成份在体外对HepG2细胞的抑制作用, 并利用裸小鼠的移植瘤模型研究灵芝孢子粉在体内对HepG2细胞的生长抑制作用. HE染色观察肝癌组织结构和细胞形态改变。
结果: TMTT实验结果表明灵芝孢子粉对HepG2细胞的IC50值随作用时间增加而减小,72 h达到最低, 为2.14 g/L. 体内抑瘤实验结果显示灵芝孢子粉为2000mg/kg时, 对裸小鼠移植瘤的抑制率为57.0%. 镜下观察灵芝孢子粉治疗组肿瘤坏死组织较多, 细胞异型性较小。
结论: 高浓度及高剂量的灵芝孢子粉具有抑制肿瘤细胞生长的作用。
背景资料:灵芝是担子菌纲多孔科灵芝属真菌, 公认为扶正固本, 滋补强壮的传统中药. 临床报道孢子粉可改善机体的免疫功能, 防治癌症, 减轻患者对放、化疗的不良反应。
灵芝是担子菌纲多孔科灵芝属真菌, 其生长成熟后所散发出来的孢子体即灵芝孢子粉。 灵芝孢子粉富含多糖肽, 有机锗, 多种氨基酸, 脂肪酸及微量元素等成份. 临床报道孢子粉可改善机体的免疫功能, 防治癌症, 减轻患者对放、化
疗的不良反应。 以往药理研究表明, 灵芝孢子粉可增强免疫功能, 并对多种移植性动物肿瘤有明显的抑制作用[1-3]. 但灵芝孢子粉对体外培养人癌细胞的直接作用及人癌裸鼠移植瘤治疗作用的研究则较少. 本文报道灵芝孢子粉体外对
人肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用及对裸小鼠人HepG2移植瘤的抗肿瘤作用的研究。
1 材料和方法
1.1 材料 HepG2为人肝癌细胞株
1.2 方法
1.2.1 体外细胞毒实验(MTT法)
1.2.2 体内抑瘤实验(人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤的生长抑制实验): 取对数生长期的人肝癌HepG2细胞, 2.5 g/L胰酶消化后, 用无血清DMEM配成1×1010 cell/L的单细胞悬液. 在无菌条件下接种于裸鼠腋窝皮下, 0.2 mL/只(相当于每只裸鼠接种2×106个肿瘤细胞)[5]. 接种1 wk后可见肿瘤生长, 当肿瘤大小到直径约为3-4 mm时(接种10 d以后), 将荷瘤裸鼠按肿瘤大小随机分为3组, 每组7-8只裸鼠, 雌雄兼有, (1)空白组:生理盐水100 mL/kg, ig, 每日给药; (2)阳性对照组: 5-FU, 用生理盐水稀释, 无菌分装, 20 mg/kg,i p, 隔日给药; (3)给药组: 灵芝孢子粉B, 5 g/LCMC-Na配制, 高压灭菌, 2000 mg/kg, ig, 每日给药。 共给药21 d. 自接种后每日测量裸鼠体质量,每周用游标卡尺测量裸鼠肿瘤的长(a)短(b)径,并按以下公式计算相对体积. V = 0.5ab2, 各组按时间点的平均瘤体积作生长曲线图. 末次给药后24 h时处死动物, 剥离肿瘤称质量. 做大体和病理观察, 部分肿瘤组织用40 g/L多聚甲醛固定,石蜡包埋, 连续4 μm切片, HE染色, 光镜下观察肝癌细胞坏死, 形态改变情况。计算各组抑瘤率,抑瘤率 = (1-用药组平均瘤质量/空白组平均瘤质量)×100%, 实验重复两次。统计学处理 用SPSS10.0统计软件进行分析, 结果以mean±SD表示, 用One-Way ANOVA和t -test进行分析. 给药组组间比较用LSD法。
2 结果
灵芝孢子粉水溶性成份对HepG2细胞的作用 灵芝孢子粉水溶性成份对HepG2细胞具有明显的抑制作用, 随着时间延长和剂量的增加, 对研发前沿药理研究表明, 灵芝孢子粉可增强免疫功能, 并对多种移植性动物肿瘤有明显的抑制
作用。