前列腺增生症是老年男性常见疾病,随着我国进入老龄化社会,对前列腺增生的研究则更为紧迫。目前治疗前列腺增生的方法有多种,但其副作用及药物依赖性等原因使其应用受到限制。中药由于具有安全副作用少、疗效肯定、适合长期服用等特点,在治疗前列腺增生方面具有一定的优势,有着较好的发展前景。本研究应用去势并皮下注射丙酸睾丸酮方法制备大鼠前列腺增生模型,给予中药癃闭康干预,观察癃闭康对前列腺增生的抑制作用。
目的:探讨癃闭康抑制大鼠前列腺增生的作用。 方法:应用去势并皮下注射丙酸睾丸酮方法制备大鼠前列腺增生模型,随机分为对照组,模型组,前列康组,癃闭康低剂量组、中剂量组、高剂量组,观察各组大鼠前列腺湿重、前列腺指数以及前列腺组织在光镜和电镜下的病理变化。 结果:模型组大鼠前列腺湿重、前列腺指数高于对照组(P<0.01);癃闭康治疗组、前列康组各项指标低于模型组(P<0.01);癃闭康高剂量组各项指标低于癃闭康中、低剂量组(P<0.01)及前列康组(P<0.01),光镜下病理结构接近对照组。 结论:癃闭康具有抑制前列腺增生的作用,疗效与剂量呈正相关关系。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 雄性SD大鼠48只,体重256~340g,河北医科大学实验动物中心提供,合格证编号:608003。
1.1.2 实验药物 癃闭康,组方:黄芪、党参、知母、黄柏、肉桂、穿山甲、王不留行、川牛膝、泽泻等。以上药物由乐仁堂药店提供。将以上药物用纯水漂洗,水煎、过滤、浓缩,至含生药4g.ml。前列康片,浙江康恩贝制药股份有限公司生产,批号:Z33020303,规格:0.5g.片。前列康5片溶成20ml溶液。丙酸睾丸酮,购自天津金耀氨基酸有限公司,批号:H12020531,规格:1ml:25mg×10支。3ml溶于57ml精制注射用花生油,4℃冰箱保存备用。
1.2 实验方法
1.2.1 造摸方法 随机取8只为正常对照组,另外40只进行造模,先用3%戊巴比妥钠1mg.kg腹腔注射麻醉,常规消毒皮肤,经阴囊摘除双侧睾丸,残端处结扎,确保止血,缝合皮肤,肌肉注射青霉素20万U.只。5d后随机分为模型组、前列康组和癃闭康低、中、高剂量组,每日皮下注射丙酸睾丸酮5mg·kg -1 ·d -1 ,连续28d,诱导其前列腺增生。
1.2.2 给药 对照组,每天皮下注射生理盐水5mg·kg -1 ·d -1 ,同时灌服生理盐水1g·kg -1 ·d -1 ;模型组,每天皮下注射丙酸睾丸酮5mg·kg -1 ·d -1 ,同时灌服生理盐水1g·kg -1 ·d -1 ;前列康组,每天皮下注射丙酸睾丸酮5mg·kg -1 ·d -1 ,同时灌服前列康水溶液(1g·kg -1 ·d-1 相当于临床用量的10倍);癃闭康低剂量组,每天皮下注射丙酸睾丸酮5mg·kg -1 ·d -1 ,同时灌服癃闭康水溶液(13.3g·kg -1 ·d -1 相当于临床用量的5倍);癃闭康中剂量组,每天皮下注射丙酸睾丸酮5mg·kg-1 ·d-1 ,同时灌服癃闭康水溶液(26.7g·kg -1 ·d -1 相当于临床用量的10倍);癃闭康高剂量组,每天皮下注射丙酸睾丸酮5mg·kg -1 ·d -1 ,同时灌服癃闭康水溶液53.4g·kg -1 ·d -1 (相当于临床用量的20倍)。每隔7d称重,根据体重调节给药剂量,连续给药28d。
1.3 检测指标及方法
1.3.1 前列腺湿重、前列腺指数的计算 末次给药后24h,各鼠称体重(g)后断颈处死,剖开下腹部,仔细分离摘除前列腺,小心将其完整地取出,去除附带组织,用滤纸吸去表面液体,用电子天平称前列腺湿重(mg),计算前列腺指数=前列腺湿重(mg).体重(g)。
1.3.2 前列腺组织病理学改变 末次给药后24h,断颈处死, 迅速取出前列腺组织,先肉眼观察摘除的前列腺标本,然后前列腺组织用4%多聚甲醛固定,常规脱水、石蜡包埋、切片5μm,HE染色,光镜下观察前列腺细胞形态变化。每组随机取1只大鼠,前列腺组织切成l mm 3 大小(低温下进行),用4%戊二醛预固定,然后用1%锇酸固定。梯度乙醇脱水,以SPURR低浓度包埋剂(美国生产)包埋,聚合。半薄切片,厚度为1~2μm,用多色染液染色,并光镜观察
和定位。莱卡UCT超薄切片机超薄切片,厚度为50~60nm,并用醋酸铀和柠檬酸铅染色,于透射电镜(日立H-7500)下观察前列腺组织超微结构并照像。
1.4 统计学分析 采用SPSS11.5软件,检测结果以均值和标准差表示,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 大鼠前列腺湿重及指数的改变 见表1。模型组前列腺湿重及前列腺指数均高于对照组(P<0.01),表明模型成立。癃闭康组及前列康组2项指标均低于模型组(P<0.01),说明各组药物对前列腺增生有治疗作用;其中癃闭康高剂量组与癃闭康中剂量组、低剂量组比较两项指标差异明显(P<0.01),说明癃闭康各用药组前列腺湿重及指数随剂量增大而下降;癃闭康高剂量组的两项指标均低于前列康组(P<0.01),说明癃闭康高剂量组对前列腺增生的抑制作用强于前列康组。
2.2 前列腺病理变化
2.2.1 大体病理变化 对照组前列腺表面光滑,组织柔韧有弹性,与周围组织分界清楚。模型组前列腺体积比对照组明显增大,脆性大,与膀胱组织有粘连。前列康组与癃闭康组中的前列腺体积较模型组缩小,组织炎性水肿及脆性减轻;癃闭康高剂量组与对照组相近,无明显粘连,质地柔韧有弹性。
2.2.2 光镜下改变 镜下观察对照组前列腺组织由大小不等的腺体组成,腺体间结缔组织很少,排列呈单层柱状上皮,核沿细胞底部单层排列,腺腔呈椭圆形或长圆形,部分腺上皮形成稀疏的皱褶或乳头状结构突向腺腔,腺腔内见较多红染物质。模型组腺上皮增生,形成密集的皱褶或乳头状结构充满腺腔,管壁增厚,部分腺体周围有结缔组织增生,腺腔内红染物质较少(图1)。前列康组、癃闭康低剂量组、中剂量组均有部分腺上皮增生,腺上皮皱褶或乳头状结构数量较模型组减少。癃闭康高剂量组与对照组接近,腺上皮皱褶或乳头状结构数量减少,腺腔内红染物质增多(图2)。
2.2.3 电镜下改变 正常组:前列腺上皮分泌细胞呈柱状,细胞界限清楚,细胞核卵圆形,长轴与细胞长轴一致,核仁不明显,异染色质多,基部胞质内含一些短线粒体、粗面内质网和游离核糖体,分泌颗粒少,有脂滴。模型组:前列腺上皮分泌细胞呈高柱状,细胞界限不清,核仁明显,胞浆丰富,线粒体、粗面内质网丰富,部分粗面内质网呈囊状扩张,分泌颗粒增多(图3)。癃闭康高剂量组:前列腺上皮细胞呈短柱状或扁平立方状,界限不清,细胞核不规则,异染色质较多、积聚,靠边呈团块,线粒体大部分嵴融合或消失,分泌颗粒较多(图4)。
图1 光镜下模型组前列腺组织皱褶密集乳头状结构充满腺腔管壁增厚腺体周围有结缔组织增生(HE×100)(略)
图2 光镜下高剂量组前列腺组织腺上皮皱褶或乳头状结构数量减少(HE×100)(略)
图3 电镜下模型组前列腺组织表现为细胞界限不清,核仁明显,部分粗面内质网呈囊状扩张,分泌颗粒增多(HE×4000)(略)
图4 电镜下高剂量组前列腺组织表现为细胞界限不清,细胞核不规则,异染色质较多,积聚,靠边呈团块,分泌颗粒较多(HE×4000)(略)
表1 各组大鼠前列腺湿重和前列腺指数(略)
注:与正常组比较, # P<0.01;与模型组比较, * P<0.01;与前列康组比较, △ P<0.01;与高剂量组比较, ▲ P<0.01
3 讨论
前列腺增生在中医理论中属”癃闭”范畴。中医辨证分析癃闭原因繁杂,主要有湿热蕴结、肺热气壅、脾气不升、肾元亏虚、肝郁气滞、尿路阻塞等。中医在辨证基础上,辨证论治,有副作用小,可长期用药,疗效可靠等优点,对患者整体体质的调节及控制病情的进展起着重要作用[1] 。王彦田教授认为治疗该病应从气虚、血瘀、湿阻论治。以补气、活血、祛湿为组方原则,根据临床经验采用黄芪、党参、知母、黄柏、肉桂、穿山甲、王不留行、川牛膝、泽泻、车前子治疗。黄芪、党参补气行气,以利尿,为君药;穿山甲、王不留行、川牛膝活血化瘀,通行经络,使瘀去新生,络脉通畅,泽泻、车前子使湿邪从小便而出,作为臣药;知母、黄柏、肉桂加强清利湿热的作用,为佐使药,协助君臣药更好发挥疗效,共同达到补气活血、祛湿利水的作用。
现代药理学研究证明黄芪具有抗病毒感染、保护肾脏、抗缺氧、抗自由基氧化、抗衰老、抗肿瘤、增强机体免疫力等功效,还有促雌激素样作用和较广泛的抗菌作用[2] 。党参能扩张周围血管而降低血压,并可抑制肾上腺素的升压作用。知母根茎含多种甾体皂甙,有明显的解热、祛痰、利尿、降血糖作用。知母总多糖是其主要抗炎活性成分,对急慢性炎症均有明显的抑制作用[3] 。黄柏对多种致病细菌均有抑制作用;对血小板有保护作用;有利尿、降压、解热等作用。肉桂有扩张血管、促进血循环、使血管阻力下降等作用。桂皮油对革兰氏阳性及阴性菌有抑制作用,桂皮的乙醚、醇及水浸出液对多种致病性真菌有一定的抑制作用。穿山甲有报道表明,可延长大白鼠的凝血时间,增加狗股动脉血流量,抑制血小板聚集,为治疗前列腺增生的要药[4] 。川牛膝苯提取物有降压及利尿作用,所含昆虫变态甾体激素具有强的蛋白质合成促进作用。泽泻有显着的利尿作用,能增加尿量、尿素与氯化物的排泄,对肾炎患者利尿作用更为明显,有降压作用。车前子有显着利尿作用。综上所述,癃闭康中多数药物具有抗菌、抗炎作用,部分药物具有抗凝、扩张血管、降压利尿等作用,这与前列腺增生从气虚、血瘀、湿阻论治,采用补气活血、祛湿利水之法是吻合的。
本实验研究以去势加丙酸睾丸酮皮下注射法诱发大鼠前列腺增生模型,采用常规病理与超微病理观察等方法,观察癃闭康对实验性前列腺增生大鼠前列腺的影响。结果表明,模型组前列腺湿重及前列腺指数均高于对照组(P<0.01),前列腺增生的模型成功建立,与文献报道一致[5-7] 。癃闭康各剂量组大鼠湿重及前列腺指数均低于模型组(P<0.01),高剂量组两项指标低于中、低剂量组及前列康组(P<0.01)。大体病理观察癃闭康各组前列腺体积较模型组缩小,炎症、水肿及粘连程度减轻。光镜下腺上皮皱褶和乳头状结构数量明显减少。电镜显示,给予癃闭康后,高剂量组出现凋亡的早期征象。
综合以上结果表明癃闭康对前列腺增生有抑制作用,与剂量成正相关关系;癃闭康高剂量组对前列腺增生的抑制作用强于前列康组,其可能的作用机制有待进一步探讨。
参考来源:《河北医药》2007年6月35卷6期;《癃闭康抑制前列腺增生作用的实验研究》;张茶 尹智炜 谷银强 王彦田