活血通络胶囊主要是由黄芪、银杏等多味中药组方,经现代T艺加工制成具有破血逐瘀、舒脑通络等功效的胶囊剂。本研究以一种新的前处理方法建立了方中黄芪甲苷的含量测定方法,经实验表明,该方法用于测定黄芪甲苷不仅简单、快速,而且专属性强,可以作为该品种的质量控制。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(Allianee 2695四元泵、自动进样系统、柱温箱、Empower色谱工作站),Alltech ELSD一2000蒸发光散射检测器.MilliporeMilli—Q纯水器.METTLER万分之一及百万分之一电子天平 黄芪甲苷对照品购自中国药品生物制品检定所,批号:110781—200512;乙腈为色谱纯。
2 方法与结果
采用汉邦ODSC, (4.6mmx250rnm,5I,.Lm)色谱柱,柱温35℃ ,流动相为乙腈~水(36:64),流速为1mL/min,检测器为Alltech ELSD一2000蒸发光散射检测器(漂移管温度为105cC.气体流量为2.2L/min)。
结果:黄芪甲苷在2.360~14.161*g范围内呈良好线性关系,平均回收率为97.77% .RSD为2.5%。本方法简便、准确、可靠,可以用于该制剂的质量控制。
目前黄芪甲苷文献报道多用水饱和正丁醇萃取一HPLC—ELSD法测定,该方法过程较复杂。溶剂用量多,易造成黄芪甲苷的损失,使测定结果偏低。由于本制剂在制备工艺过程中采用了大孔树脂的精制工艺,根据黄芪甲苷的化学性质及本制剂的制备工艺,本实验比较了不同前处理提取方法对本方中黄芪甲苷含量的影响,如甲醇直接超声提取、固相萃取方法及传统的正丁醇和氨水萃取法等。最终确定采用甲醇超声提取并在其中加碱的方法作为样品前处理方法。测定结果表明本法操作简便,结果可靠供试品溶液的制备中。
本实验比较了甲醇、乙醚、氯仿、乙醇、60%乙醇等不同提取溶剂对测定结果的影响,结果表明采用甲醇提取效率最高,同时本实验对超声时间、超声提取次数的比较结果表明,加25倍量的甲醇、超声30min,提取1次就能取得较好的提取效果,实验中发现如不经过氨水碱化则含量较低,碱化后含量明显提高,这与文献中报道用正丁醇萃取后用氨水洗相符。而加入不同量的氨水对黄芪甲苷的测定也有一定影响。通过考察发现20mL提取液中加3mL氨水效果较好实验结果表明,该方法不仅专属性和稳定性好,而且测定快速、精确,对于那些前处理比较复杂,但工艺中已采用了一定精制工艺的制剂质量标准的建立有一定的指导意义。
来源:孔铭 钱大玮(1.江苏省中医药研究院,江苏南京210028;2.南京中医药大学,江苏南京210046)《江苏中医药》2009年07期