骨质疏松症是一种以骨强度受损为特征的骨骼疾病。其病因很多,最终结果为成骨过程低于破骨过程,骨量和骨质量下降。成骨细胞是骨质生发、形成的物质基础,只有其不断的分裂增殖才可以产生丰富的胶原基质,通过矿化作用形成更多骨质。金天格胶囊的主要成份为人工虎骨粉。本研究观察金天格胶囊对成骨细胞的影响,探讨其对成骨细胞作用的机理。
主要研究方向:骨质疏松的诊断与治疗,的MEM 培养液重悬细胞,接种于75cm~75cm培养瓶,于37℃,25%CO 条件下培养,次日换液弃去悬浮细胞,每隔两日换液1次;消化后的骨碎片可贴于25cm~25cm培养瓶壁(25—40个碎骨粒/瓶),加入含15% PBS的MEM 培养液,37~C,25%CO 条件下培养,l周后换液,以后隔两日换液1次,即得到酶消化法及骨片贴附法所获得的人成骨样细胞(HOB)。
应用金天格胶囊(金花企业股份有限公司高新制药厂生产)lg,加入含l5%PBS的MEM培养液(pH值为7.3.7.4,过滤除菌)lOml中,用0.451~m滤器除菌,配成浓度为0.1g/ml的溶液。依上法可配制成浓度为5p~g/ml、10l~g/ml、20~g/ml的金天格胶囊药液。
将处于生长旺盛的人成骨样细胞(HOB),接种于25cm~25cm培养瓶(第2代),用无酚红MEM 培养液(含15%PBS、VitC50~g/ml、青霉素50U/ml、庆大霉素50~g/m1)培养,取细胞
悬液加到24孔板上,每孔lml。放人37~C培养箱中培养。待细胞贴壁后,第2天加入配好的金天格胶囊药液。
统计方法:定量指标用均数±标准差表示。采用x 检验或t检验,P<0.05为有统计学意义。
金天格胶囊药液可以明显刺激成骨细胞的增殖,与不用药组对比有显著差异,并随药物浓度的增加,成骨细胞数明显增多(P<0.05);反映成骨细胞活性的AKP、BGP随药物浓度的增加也相应升高,与不用药组对比有显著差异(P<0.05);反映破骨细胞活性的PYD则随药物浓度的增加而相应下降,与不用药组对比有显著差异(P<0.05 o
成骨细胞是参与骨代谢的重要细胞,它与破骨细胞共同维持着骨代谢重建的平衡。骨质疏松发生的机理是骨形成落后于骨溶解,在骨的重建过程中无法完全修复破坏的骨质,使其骨量不断减少、骨质量下降。因此,治疗骨质疏松的关键是促进成骨细胞的成骨过程,缓解破骨细胞的破骨过程。本研究成功培养出HOB。碱性磷酸酶染色阳性细胞计数可直接代表该细胞群的数量与纯度。
本研究联合检测金天格胶囊药液干预试验后的AKP、BGP、PYD的含量并进行细胞计数,结果表明加药后细胞数随药物浓度增加而增加,AKP、BGP水平也相应提高,Ⅲ组的AKP、BGP水平较I组和II组增加明显,与不用药组对比存在统计学差异(P<0.05),说明金天格胶囊有直接刺激成骨细胞增殖及加强其活性的作用,并且提高金天格胶囊的浓度(用量)有利于药效的发挥。再者,标本检测中发现的PYD,可能是成骨细胞传代过程中部分细胞破坏,释放某种物质降解胶原产生的,本研究显示加大金天格胶囊药液的浓度可使培养液中PYD的浓度下降(P<0.05),这说明金天格胶囊也有抑制破骨的作用。
(本文节选自《金天格胶囊对成骨细胞作用的研究》)