【摘要】目的:研制与上市品具有相似体外溶出的复方缬沙坦/苯磺酸氨氯地平片。方法:用湿法制粒压片工艺制备自制品,通过单因素试验初步筛选处方,中心复合设计优化处方。比较不同pH溶出介质(pH 1.2盐酸、pH4.5乙酸缓冲液和0.1%聚山梨酯80-pH 6.8磷酸缓冲液)中自制品与市售复方片的溶出行为,通过相似因子f 2计算,评价2种药物体外溶出的相似性。结果:与市售片比较,以优化处方制备的复方片中缬沙坦和苯磺酸氨氯地平在不同pH 值溶出介质中的溶出度相似因子f 2均>50。结论:自制的复方片与市售片体外溶出行为相似。
缬沙坦(valsartan)是一种新的抗高血压药物,属于血管紧张素II 受体拮抗剂(ARB)。通过对肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAS系统)特异性阻断来实现控制血压的效果。研究显示,缬沙坦的人体生物利用度约30%,达到血浆高峰浓度时间是2 h,清除半衰期7 h。血浆蛋白结合率85%~99%,人的稳态分布容积约为17 L,以原形排泄,其中胆汁排泄70%,肾脏排泄30%。该药还具有长效、高效、低毒等特点,为临床高血压的治疗提供了一种新药。苯磺酸氨氯地平(amlodipine besylate)属于钙通道阻滞剂(CCB),主要是通过阻滞心肌和血管平滑肌细胞外的钙离子通道,发挥抗高血压及抗心绞痛作用。
两者的复方片剂(Exforge,倍博特®)是全球第一个ARB/CCB单片复方制剂,由瑞士诺华公司(Novartis Pharma Schweiz AG)研发。2007年6月Exforge 获美国FDA批准上市,2009年9 月被SFDA批准在中国上市。倍博特®的制备工艺是干法制粒压片,诺华公司在中国申请的相关制备方法专利已公开,海南锦瑞公司申请的直接压片以及浙江华海公司申请的干法制粒工艺均获授权。本研究采用湿法制粒压片工艺制备与倍博特®具有相似溶出行为的复方缬沙坦苯磺酸氨氯地平片。
材料
ZRS-8G 智能溶出仪(天津市天大天发科技有限公司);TDP单冲压片机(上海天祥健台制药机械有限公司);YPD-300D 片剂硬度仪(上海黄海药检仪器有限公司);LC- 0AT 效液相色谱仪(日本岛津公司);MA35水分测定仪(赛多利斯科学仪器有限公司);FT-2000AE脆碎度仪(天津市天大天发科技有限公司);BY300A小型包衣锅(上海黄海药检仪器厂)。
苯磺酸氨氯地平原料(福州辰星药业有限公司,批号:20100614);缬沙坦原料(福州辰星药业有限公司,批号:20100523);苯磺酸氨氯地平对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100374-200903,HPLC含量为99.4%);缬沙坦对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100651-200902,HPLC含量为98.9%)。羧甲基淀粉钠(CMS-Na,安徽山河药用辅料有限公司);预胶化淀粉(安徽山河药用辅料有限公司);聚维酮(PVP-K30,International Specialty Products Inc.);微粉硅胶(安徽山河药用辅料有限公司);硬脂酸镁(安徽山河药用辅料有限公司);包衣粉(欧巴代®295B620003,上海卡乐康包衣技术有限公司);乙腈(色谱纯,山东禹王实业有限公司);甲醇(色谱纯江苏汉邦科技有限公司);其余试剂均为市售分析纯;纯化水(实验室自制)。
方法
1 处方和工艺单因素筛选
参考相同品种专利中公开的制备工艺与处方组成,固定缬沙坦和苯磺酸氨氯地平主药量分别为片重的47.9%和4.16%,进行湿法制粒压片处方与工艺的初步筛选。
1.1 填充剂的筛选
分别以片重32.4%的微晶纤维素(CC101)、预胶化淀粉、乳糖为填充剂,考察填充剂对2种药物溶出的影响。
1.2 崩解剂的筛选
分别以12%的交联聚维酮(PVPP)、羧甲基纤维素钠(CCNa)、低取代羟丙基(L-HPC)、羧甲基淀粉钠(CMS-Na)为崩解剂,全部内加,考察崩解剂对2种药物溶出的影响。
1.3 黏合剂的筛选
分别以10%淀粉浆、3% PVP-K30水溶液、3%HPMC E5以及3% PVP-K30的70%醇溶液适量为黏合剂,考察黏合剂种类对2种药物溶出的影响;在确定了黏合剂种类后,考察黏合剂用量对2种药物溶出的影响。
1.4 润滑剂和助流剂的筛选
考察加与不加0.9%微粉硅胶对2种药物溶出的影响。以0.9%~2.7%硬脂酸镁为润滑剂,考察不同加入方式(内加、外加、内外加)对2种药物溶出的影响。
1.5 烘干时间和温度对水分的影响
采用不同的黏合剂得到的颗粒分别放置于40 ℃和60 ℃下烘干,40 ℃于2,4,6,19 h以及60 ℃于2,4,5h取样2g,利用水分测定仪,考察2种温度使颗粒水分低于3%需要的时间。
2 复方片制备工艺
将苯磺酸氨氯地平与等量的崩解剂混合;将助流剂与等量的缬沙坦混合,再与剩余量崩解剂混合;将上述两者混合后,采用等量递加与剩余量缬沙坦、填充剂过80 目筛混合3遍,制软材,20目筛制粒,60 ℃烘干2~4 h,18目筛整粒,与处方量润滑剂混合均匀,压片,即得素片。
将卡乐康欧巴代(黄色)薄膜包衣材料8 g在高速分散器的作用下(5000 r•min-1,5 min)缓慢加入到100 mL水中直至分散均匀(固含量8%),过200目筛,放入搅拌子置于磁力搅拌器上搅拌45 min,采用小型包衣锅进行包衣(片床温度控制在40 ℃,包衣锅的转速为30 r•min-1,包衣液流速为0.5 mL•min-1),包衣增重控制在3%,包衣结束后在包衣锅内40 ℃陈化30 min,即得自制品。
3 处方优化
3.1 中心复合设计
从单因素试验中发现不同崩解剂对药物的溶出影响较大,CMS-Na为崩解剂时自制品的溶出和上市品相似,为进一步考察崩解剂用量的影响,将CMS-Na用量作为中心复合设计的因素之一。在单因素试验中,CMS-Na 用量为12%,而CMS-Na常用量范围为1%~8%,设计CMS-Na 量的范围为6 ~12%。在单因素试验中,未考察硬度的影响,而理论上硬度对片剂溶出度有直接的影响,故将其直接作为中心复合设计的因素之一。测定上市品倍博特®的硬度为9~13 kg(包衣片),素片包衣后,其硬度可达9~12 kg,故素片的硬度选择低于包衣片,设计素片硬度范围为5~9 kg。
使用Design Expert 7软件进行小中心复合实验设计对复方缬沙坦苯磺酸氨氯地平片处方工艺进行优化,选取CMS-Na用量和片剂硬度为因素,因素水平表见表1。以自制品和上市品中2种药物溶出曲线的相似因子f 2值为评价指标,考察2个因素的影响。各个处方CMS-Na用量和硬度见表2,参见上述制备方法,压片时硬度控制在设定的值。
3.2 处方重现性考察
依据优化后的处方和工艺进行实验重现,制备3 批,每批200片,参考缬沙坦氨氯地平片(I) 进口药品注册标准(JX20080182)和2010年版《中华人民共和国药典》,考察自制品的硬度、溶出、脆碎度和含量均匀度。
4 溶出度测定
4. 1 溶出方法
根据《中华人民共和国药典》2010年版溶出度项下桨法,取各处方自制品与市售品,以0.1% 聚山梨酯80的磷酸盐缓冲液(pH 6.8)1000 mL为溶出介质,转速65 r•min-1,温度(37±0. 5) ℃,分别于5,10,15,30,45,60 min取样10 mL(随行向溶出杯中补充等量同温新鲜溶出介质)。样液经0.45 μm微孔滤膜过滤,取5 mL续滤液于10 mL量瓶中,稀释至刻度,摇匀,作为供试液,20 μL进样,按外标法计算氨氯地平和缬沙坦的累积溶出百分率。
4.2 分析方法的建立
4.2.1 色谱条件 依据缬沙坦氨氯地平片(I)进口药品注册标准(JX20080182),用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-水-三氟乙酸(400:600:2);流速为1.2 mL•min-1,检测波长为230 nm,柱温为40 ℃。
4.2.2 对照品溶液的配制 依据缬沙坦氨氯地平片(I)进口药品注册标准(JX20080182)中溶出度的测定方法,取苯磺酸氨氯地平对照品17.3 mg,精密称定,置500 mL量瓶中,加甲醇20 mL使溶解,用溶出介质稀释至刻度,摇匀,作为氨氯地平贮备液;精密称取缬沙坦对照品20 mg,置500 mL量瓶中,加甲醇10 mL使溶解,精密加入氨氯地平贮备液50 mL,用溶出介质稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
4.2.3 分析方法专属性考察 称取4 mg按处方比例混匀的辅料至50 mL量瓶中,加甲醇适量,超声15 min,用溶出介质稀释至刻度,过0. 45 μm滤膜,取1 mL续滤液稀释至10 mL,作为空白辅料溶液。分别称取6.92 mg 苯磺酸氨氯地平和80 mg缬沙坦到10 mL量瓶中,用适量甲醇溶解后,用溶出介质稀释至刻度,作为苯磺酸氨氯地平溶液和缬沙坦溶液。取空白辅料溶液、苯磺酸氨氯地平溶液和缬沙坦溶液各20 μL进样,记录色谱图,考察在此液相条件下辅料对两药以及两药间相互干扰情况。
4.2.4 标准曲线的绘制 精密称取6.92 mg苯磺酸氨氯地平对照品至100 mL量瓶中,用5 mL甲醇溶解,再用溶出介质稀释至刻度,摇匀。精密称量8 mg缬沙坦对照品到50 mL量瓶,用2 mL甲醇溶解后,精密加入10 mL苯磺酸氨氯地平溶液,稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。精密移取1,2,3,4,5,6 mL贮备液稀释至10 mL,配成一系列标准液。20 μL进样,记录色谱图,分别以苯磺酸氨氯地平和缬沙坦的峰面积(A)对质量浓度(C,μg•mL -1)进行线性回归。
4.2.5 溶液稳定性考察 取标准曲线项下溶液,分别于0,2,4,6,8 h进样20 μL,记录图谱,分别计算两药峰面积的相对标准偏差。
4.2.6 精密度考察 取标准曲线项下贮备液1,3,5 mL至10 mL量瓶,配成低、中、高3 种溶液,20 μL进样,分别同一天连续测5 次及连续5 d分别测定两药的峰面积,分别计算两药的日内、日间精密度。
4.2.7 回收率考察 分别称取9 份处方量空白辅料至100 mL量瓶中,分别加入处方量的80%,
100%,120%药物各3份,先用15 mL的甲醇溶解后,加入溶出介质稀释至刻度,超声15 min,过0.45 μm滤膜,取1 mL续滤液稀释至10 mL,摇匀后移取5 mL稀释至10 mL,即得低、中、高3种溶液各3 份,20 μL进样,记录色谱图,计算苯磺酸氨氯地平和缬沙坦的回收率。
4.3 自制品和上市品在不同pH溶出介质的溶出曲线比较
根据《中华人民共和国药典》2010年版溶出度项下桨法,取各处方自制品与市售品,以pH 1.2盐酸(或pH 4.5的乙酸缓冲液)1000 mL为溶出介质,转速65 r•min-1,温度(37±0.5)℃,分别于5, 10,15,30,45,60,90,120 min(或5,10,15,30,45,60,90,120,180,240 min)取样10 mL(随行向溶出杯中补充等量同温新鲜溶出介质)。样液经0.45 μm微孔滤膜过滤,取5 mL续滤液于10 mL量瓶中,稀释至刻度,摇匀,作为供试液,20 μL进样,按外标法计算氨氯地平和缬沙坦的累积溶出百分率。
通过相似因子f 2值计算,比较自制品和上市品的体外溶出行为,以累积溶出百分率达85%的时间点为T,分别各取0~1/4T,1/4T~1/2T和1/2T~3/4T 中一个点以及T,共4个点计算溶出度相似因子f 2值。
结果与讨论
1 处方和工艺单因素对溶出的影响
1.1 填充剂的影响
比较自制片和市售片溶出曲线发现,以预胶化淀粉和乳糖为填充剂时,缬沙坦和苯磺酸氨氯地平30 min均溶出80%以上,符合进口标准要求的30 min溶出限度(Q)的要求(标示量的75%),以MCC为填充剂时,两药30 min溶出均小于75%。而计算3个处方自制品的f 2值均未达50,以预胶化淀粉为填充剂的自制品f 2值最高,故填充剂选择为预胶化淀粉。
1.2 崩解剂的影响
比较溶出曲线可知,以CMS-Na和CCNa为崩解剂时,两药30 min溶出均>85%,且f 2值接近50,而以L-HPC和PVPP为崩解剂时,两药30 min溶出均<75%,考虑CCNa为进口辅料,故选择国产CMS-Na为崩解剂。
1.3 黏合剂的影响
比较自制片和市售片溶出曲线发现,以PVPK30的醇溶液为黏合剂时,粉末成团,无法制粒。通过试验研究发现,乙醇诱导了缬沙坦的黏性,使得粉末成团。以3% PVP-K30水溶液和3% HPMC为黏合剂时,两药30 min溶出均达90%以上,以10%淀粉浆为黏合剂则溶出不合格。考虑到HPMC的黏性较大可能对溶出不利,选择3% PVP-K30水溶液为黏合剂。由于不同黏合剂用量会导致颗粒过硬、结块等,影响崩解和溶出度,PVP-K30的常用量为2%~20%,故比较2%和3%PVP-K30为黏合剂的处方溶出曲线,发现两药30 min溶出均达90%以上,无显著性差别,故仍采用3%的PVP-K30水溶液为黏合剂。
1.4 润滑剂和助流剂的影响
比较自制片和上市品溶出曲线发现,不加微粉硅胶自制品的两药30 min溶出达不到进口标准要求(标示量的75%)。微粉硅胶属于水不溶性的,但其亲水性很好,且吸附能力强,能吸附大量药物,降低了药物粒子间的吸附功能,避免了某些细小粉末状药物的附聚与结块,促进了药物的溶解与溶出。以不同方式加入硬脂酸镁的自制品,两药30 min溶出均>85%,故选择常规外加1.8%硬脂酸镁为润滑剂。
1.5 烘干时间和温度对颗粒水分的影响
水分测定发现,40 ℃烘干均需19 h 水分<3%,60 ℃均需2~4 h水分<3%,则选择烘干条件为60 ℃,2~4 h。
2 中心复合设计处方工艺优化
采用优化处方(34.3%预胶化淀粉为填充剂,10%CMS-Na为崩解剂,3%PVP水溶液为黏合剂,0.9%微粉硅胶为助流剂,1.8%硬脂酸镁为润滑剂,素片硬度50 N)制备的3批自制品,苯磺酸氨氯地平的f 2值分别为92.65,64.39,58.52;缬沙坦的f 2值分别为74.68,93.90,85.22; 由于小试工艺不稳定等原因导致3批f 2值相差较大,但均>50,说明3批自制品和上市品的溶出曲线相似。测量3批自制品的硬度(包衣片)为9~11 kg,9~11 kg,9~12 kg,和上市品倍博特®®接近; 3批自制品的碎脆度为0.03%,0.01%和0.01%,均<1%且未检出断裂、龟裂及粉碎的片,符合《中华人民共和国药典》2010年版要求;而测定片剂中两种药物的含量均匀度发现,两种药物的A + 1.80S均<10,也符合《中华人民共和国药典》2010年版中固体制剂的含量均匀度要求。
3 溶出度分析方法
3.1 色谱系统适用性
氨氯地平峰与缬沙坦峰的分离度均>2.0;拖尾因子均<2.0;对照品溶液进样5针,RSD分别为0.24%和0.11%,均符合要求。
3.2 专属性
结果表明,在该色谱条件下,空白辅料对两种药物的测定均未见干扰.
3.3 标准曲线
以峰面积(A)对质量浓度(C,μg•mL-1)进行线性回归,在16~96 μg•mL-1范围内,缬沙坦的回归方程为A = 53098C-2203.4(r = 0.9999);在1.384~8.304 μg•mL-1范围内,苯磺酸氨氯地平的回归方程为A = 32769C-258.20(r = 0.9995),表明两药浓度和峰面积均呈良好的线性关系。
3.4 溶液稳定性、精密度与回收率
缬沙坦和苯磺酸氨氯地平溶液在0,2,4,6,8 h测得的峰面积的RSD分别为0.29% 和1.16%,说明溶出度测定溶液至少在8 h内稳定。苯磺酸氨氯地平和缬沙坦的低、中、高3个浓度的日内、日间RSD和回收率RSD均<2%,方法可靠。
4 自制品和上市品的溶出比较
通过比较自制品和上市品在标准介质0.1%聚山梨酯80-pH 6.8磷酸缓冲液中的溶出曲线,计算相似因子f 2值,苯磺酸氨氯地平和缬沙坦的f 2值分别为68.72 和95.19,说明了自制品和上市品在标准规定的溶出介质中体外溶出行为相似。同时比较了自制品和上市品在pH 1.2盐酸和pH 4.5乙酸缓冲液中的溶出,计算相似因子f 2值,在pH 1.2盐酸溶出介质中苯磺酸氨氯地平和缬沙坦的f 2值分别为56.14和59.17;在pH 4.5乙酸缓冲液中两者的f 2值分别为55.83 和56.32,f 2值均>50,说明自制品和上市品的体外溶出相似。
5 结论
本研究进行了缬沙坦苯磺酸氨氯地平复方片的处方筛选和优化,采用湿法制粒成功制备出具有和上市品相似体外溶出的片剂,符合缬沙坦氨氯地平片(I)进口药品注册标准(JX20080182)中溶出度要求以及《中华人民共和国药典》2010年版中片剂的相关要求,同时对溶出度测定进行了方法学考察。
上市品及相关专利不用湿法制粒主要原因可能是氨氯地平可能遇湿不稳定,但影响因素试验和加速试验(3个月)均未见含量降低和有关物质升高(数据未公开),虽然小试未发现含量降低和有关物质升高,但在大批量生产时的适应性还有待评估。本品辅料均为国产辅料,工艺简单,成本较低,可望降低患者的治疗费用。