肉蔻五味丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(
蒙药分册),处方由肉豆蔻、土木香、木香、广枣、荜茇等5味药材组成。肉蔻五味丸用于治疗心烦
失眠、心神不安,对心赫依病(“心赫依”病是“赫依”病影响心脏正常功能所致的病症,可出现心悸、心慌、胸胀、烦躁不安、唉声叹气、神昏谵语、头昏目赤等症状)尤为有效,肉蔻五味丸为蒙医常用药品。原标准中除显微鉴别外只对木香与土木香进行了薄层色谱(TLC)鉴别。为更好地控制肉蔻五味丸质量,笔者采用TLC法对方中肉豆蔻、广枣、荜茇进行了定性鉴别,采用高效液相色谱(HPLC)法测定了广枣中没食子酸的含量。
肉蔻五味丸含量测定:色谱条件与系统适应性试验
色谱柱:Alhech Alltima C18(250 mm×4.6 mm,5/tm);流动相:甲醇一0.1%磷酸溶液(5:95);流速:1.0mL•min~;检测波长:270 nm;柱温:室温。在此色谱条件下,没食子酸峰与其它成分峰能达到基线分离,且出峰时间适宜,峰形较好;理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于5 000。
对照品溶液的制备:取没食子酸对照品适量,精密称定,加50%甲醇制成浓度为1 nag•mL。的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取肉蔻五味丸约3 g,研细,精密称定,精密加入50% 甲醇25 mL,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。
空白试验:除广枣以外,其余各药按肉蔻五味丸处方与制法制成阴性样品,再按“3.3”项下方法制成阴性对照溶液。吸取对照品、供试品及阴性对照溶液注入色谱仪,照上述色谱条件进样测定。
结果,阴性对照溶液中在没食子酸峰的出峰位置处未出现吸收峰,表明处方中其它药材对没食子酸的含量测定无干扰。
取没食子酸对照品5.01 mg,置于10 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成浓度为0.501 mg•mL的溶液。分别精密量取此溶液0.5,0.4,0.3,0.2,0.1 mL,置于10mL量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,制成5种不同浓度的对照品溶液,分别进样20 L,照上述色谱条件测定峰面积。以浓度(x)为横坐标,峰面积积分值(y)为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程为Y=19 737x一1 691.3(r=0.999 9)。结果表明,没食子酸的检测浓度在5.01~25.05 g•mL 范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
在预试验中,曾选择甲醇一0.1%磷酸溶液(5:95)、甲醇一0.1%磷酸溶液(20:80)、乙腈一0.1%磷酸溶液(10:90)等作为流动相。结果,以甲醇一0.1%磷酸溶液(5:95)分离效果最好,故选其作为本试验流动相 。肉蔻五味丸除广枣肉豆蔻中的肉桂酸与筚茇的质量研究符合标准。
(本文节选自《肉蔻五味丸质量标准研究》)