康恼灵由川芎、当归、银杏叶,淫羊藿等组成,功能活血化瘀、补肾益智,用于血管性痴呆的治疗。研究表明,康恼灵能明显提高痴呆模型动物学习记忆能力,改善与学习记忆相关蛋白乙酰胆碱酯酶、神经生长因子的表达。本研究对康恼灵抗缺血再灌注所致痴呆大鼠自由基损伤的保护作用及对凋亡调控蛋白Bcl-2、caspase-3表达的影响进行探讨,探究康恼灵对痴呆大鼠神经元自由基损伤的保护作用及对caspase-3、Bcl-2表达的影响。
实验的方法是建立血管性痴呆大鼠模型,康恼灵给药干预后,用分光光度计检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量,荧光分光光度计检测caspase-3表达,流式细胞技术检测Bcl-2的表达。
值得一提的是,血管性痴呆是多种因素参与的复杂病理过程,缺血再灌注损伤痴呆模型中自由基损伤有重要意义,氧自由基引起的组织脂质过氧化损伤是其重要原因。缺血再灌注损伤后可产生高浓度活性氧(ROS),包括超氧阴离子自由基和NO等,氧自由基可损伤DNA,进而和其它机制一起最终导致细胞凋亡。细胞凋亡是caspase家族参与的复杂过程,NO及其类似物可通过改变线粒体膜的通透性,导致一系列caspase家族酶系的活化,从而导致细胞凋亡。Bcl-2基因是细胞凋亡的重要抑制基因,过高表达可防止或降低各种刺激如自由基、细胞因子等引起的细胞凋亡,其机理是通过抑制活性氧自由基的脂质过氧化作用而发挥抗凋亡活性。有研究表明,补肾活血类中药具有清除自由基的作用,而康恼灵恰恰是这一类补肾活血类中药,因此,在清除自由基方面疗效显著。
本实验结果表明,康恼灵能显著降低模型动物脑组织中MDA含量,提高SOD、NO含量,SOD是机体清除自由基的重要酶类,通过清除多余自由基而保证人体代谢平衡。康恼灵还可增强缺血再灌注损伤后Bcl-2的表达,降低caspase-3的表达。说明康恼灵具有抗氧化作用,可抵抗缺血再灌注后自由基大量产生,脑组织受氧自由基的损害减轻,保护脑神经细胞;并能调控凋亡、调节蛋白的表达,减少神经细胞凋亡的发生。所以康恼灵预防脑神经细胞凋亡的机制可能与减轻脑内自由基水平、调控凋亡、调节蛋白的表达有关。