他克莫司(商品名为
普乐可复,是从土壤真菌的发酵液中分离而得,是一种具有大环内酯结构的新型强效免疫抑制剂,其预防移植器官排斥的免疫抑制作用比
环孢素A(CsA)强10~100倍 ,临床已用于肝、肾等多种
器官移植的免疫抑制治疗。由于他克莫司的治疗窗窄,在不同患者间及个体自身吸收、分布和消除的差异大,给药剂量和全血浓度之间的相关性差,临床应用时为获得最佳免疫抑制效果,减少不良反应,需常规监测他克莫司血药浓度以及时调整用药剂量。
有关他克莫司的含量测定法,目前主要有酶联免疫吸附试验(EUSA)法、微粒子酶免分析法 和HPLC法(HPLC)法,为了了解他克莫司胶囊的体外溶出情况,笔者采用HPLC法测定他克莫司胶囊的溶出度,方法简便,快速,准确,结果满意,现报道如下。
均一性实验 取本品(批号050310)2粒,以水100 mL为溶剂,转速为100 r•min_。,依法操作,于5,10,20,30,45,60和75 rain时,取溶液5 mL,并立即补加5 mL溶剂于溶出杯中,溶出液用0.45 m微孔滤膜滤过,取续滤液静置6 h,作为供试品溶液;另取他克莫司对照品适量,用乙醇制成每1 mL含他克莫司250 mg的溶液;取此溶液1 mL,置于25 mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,静置6 h,作为对照品溶液。分别精密量取上述2种溶液20 L,注入液相色谱仪,记录色谱图和峰面积。按外标法以峰面积计算每粒的溶出量。
自制他克莫司胶囊与市售他克莫司胶囊的溶出度比较将溶出度数据在Excel中求出威布尔分布函数,提取m、Td和T5。等溶出参数,并对Td和T5。进行t 检验,结果表明自制他克莫司胶囊与市售他克莫司胶囊溶出度无明显差异(P>O.05)。
因本品规格为0.5 ,考虑到本品的实际情况,采用小杯法,以水100 mL为溶出介质,转速为100 ,样品用量为2粒。关于他克莫司含量测定,文献[73采用0.1%磷酸溶液一乙腈(32:68)为流动相,检测波长为205nm;文献采用乙腈一0.25%磷酸溶液(65:35)为流动相,检测波长为210 nm;文献[9]采用异丙醇一水(35:65)为流动相,检测波长为220 am。笔者采用乙腈一水(75:25)为流动相,经对他克莫司对照品溶液扫描发现,其最大吸收峰在205 nm处,考虑到末端吸收的影响,故选用220 nm作为检测波长。
实验表明,在选定的色谱条件下,他克莫司响应值高,出峰时间适中,峰形的对称性良好。由于他克莫司在溶液中会发生互变异构,因此,要进行准确定量必须使其在溶液中的各异构体比例达到稳定状态。
实验表明,溶出液静置6 h后,在5h内分析他克莫司峰面积基本不变。所以,在进行他克莫司胶囊溶出度实验时,在溶出液取出后,应严格控制静置和测定时间,使测定结果准确。本文对他克莫司胶囊溶出度实验进行了研究,实验结果表明,采用小杯法,以水100 mL为溶剂,转速为100 r•min_。,60 min时,他克莫司胶囊溶出度均大于75% ,本文选用的溶出度条件及分析方法,能有效地控制他克莫司胶囊的质量。
(本文节选自《他克莫司胶囊的溶出度研究》)