特应性皮炎患者外周血辅助性T细胞22的表达及意义

【摘要】目的 检测特应性皮炎(AD)患者外周血辅助性T细胞22(Th22)的表达，探讨其在AD发病机制中的作用。方法 以湿疹面积及严重度指数(EASI)评分评估患者病情，采用流式细胞术检测46例AD患者和28例健康对照者外周血Th22(IL-22)细胞，ELISA法检测血清中IL-22、IFN-γ、IL-4水平。结果 AD患者外周血Th22细胞(2.35±0.64)%，明显高于对照组的(0.94±0.43)%(P＜0.01)；Th22细胞与血清中IL-22呈正相关(r=0.48，P＜0.05)，而与IFN-γ、IL-4无相关(r=-0.105，P＞0.05；r=-0.267，P＞0.05)，Th22细胞与疾病的EASI评分呈正相关(r=0.53，P＜0.05)。结论 Th22细胞有可能作为监测AD严重程度或病情波动的指标。

【关键词】特应性皮炎；外周血；辅助性T细胞22

 

特应性皮炎亦称异位性皮炎，是一种与遗传有关的特发性炎症性皮肤病，病因尚不清楚，有学者认为Th22细胞在AD的发病机制中起到一定的作用。本实验通过检测AD外周血Th22细胞的数量，分析其与IL-22、IFN-γ、IL-4及疾病EASI评分的相关性，进而探讨其在AD发病机制中的作用与临床意义。

 

1 资料与方法

1.1 一般资料 2011年2月至2012年1月我院门诊AD患者46例，均符合1980年Hanifin和Rajka制定的诊断标准，停用抗组胺药一周以上，半年内未使用过糖皮质激素及免疫抑制剂。其中男26例，女20例；年龄2~48岁，平均(21.1±6.36)岁；3例伴有过敏性鼻炎病史，2例伴有哮喘病史。另选择健康志愿者28例作为对照，其中男16例，女12例；年龄3~46岁，平均(23.56±4.36)岁。所有检查均征得患者和志愿者的知情同意，并填写知情同意书。

 

1.2 仪器与试剂 流式细胞仪器为Beckman Coulter EP-ICS XL产品；单克隆荧光直标抗体鼠抗人IL-22A-FITC，CD4-Pecy5为美国Biolegend公司产品及相应的同型对照FITC标记鼠IgG1、Pecy5标记鼠IgG1；固定剂及破膜剂(FIX&PERM Caltag公司)；RPMI1640、PMA、Ionomycin和Monensin(Sigma公司)；美国产BB5060型CO₂细胞培养箱；ELISA试剂盒购自杭州联科生物有限公司。

 

1.3 方法

1.3.1 Th22的检测 采用流式细胞术，无菌抽取静脉血3ml，枸橼酸钠充分抗凝。按一定的比例进行全血细胞刺激培养4h(全血细胞刺激培养：每管加入0.5ml无血清的RPMI-1640培养液、0.5ml枸橼酸钠抗凝的全血和终浓度为25ng/ml的PMA、1μg/ml的Ionomycin、20ng/ml的Monensin，混匀后置于37℃、5%CO₂培养箱中培养4h)。培养后的全血细胞经PBS洗涤后，分成2管，分别加10 μl抗CD4+抗体进行表面染色，混匀后室温暗处放置30 min；加固定剂50μl，室温放置15 min加入4ml PBS洗涤，1500r/min，离心10min，去上清液；加通透剂30μl，2管分别加入抗IL-22抗体及FITC抗体同种型对照，混匀后室温暗处放置15 min，用相配套溶血素溶血，洗涤1次，去上清液，加PBS 500μl配成1.0×10⁷/L的细胞悬液，待上机检测。

 

1.3.2 血清IL-22、IFN-γ、IL-4的检测 采用ELISA法，用促凝管采空腹静脉血2ml，3000rpm，10min分离上清液，取足够上清液于离心管中，70℃保存，备用，避免反复冻融，操作步骤按照试剂盒说明进行。

 

1.4 统计学处理 使用SPSS 12.0统计软件进行统计学处理，采用均数±标准差(x(-)±s)表示，进行独立样本t检验，相关性分析采用Spearman相关分析，P＜0.05表示差异有显著性。

 

2 结果

2.1 AD患者外周血Th22细胞为(2.35±0.64)%，明显高于对照组的(0.94±0.43)%，差异有极显著性(P＜0.01)。

 

2.2 对46例AD患者血清中细胞因子进行检测，结果显示：IL-22的浓度为(8.76±9.36)pg/ml；IFN-γ的浓度为(33.69±10.28)pg/ml；IL-4的浓度为(18.76±11.53)pg/ml。分别将其与Th22细胞作相关性分析，结果显示：IL-22与Th22细胞呈正相关(r=0.48，P＜0.05)，IFN-γ、IL-4与Th22细胞均无相关(r=-0.105，P＞0.05；r=-0.267，P＞0.05)。

 

2.3 按照湿疹面积及严重度指数(EASI)评分法对AD患者病情严重程度进行评分，46例AD患者评分为(23.86±18.35)(范围：0~62.6)，Th22细胞与EASI评分呈正相关(r=0.53，P＜0.05)。

 

3 讨论

特应性皮炎是皮肤科常见病、多发病，正成为公共健康的主要问题之一。目前，研究特应性皮炎与Th细胞亚群的文献很多，但结论各不相同，随着对特应性皮炎及Th细胞亚群研究的逐渐深入，Th细胞亚群及其细胞因子在特应性皮炎中的作用得到更广泛的关注。传统观点认为AD的发病与Th1/Th2的失衡有关。

 

最近几年，有报道称，在异位皮炎病人的病灶组织中存在一群产生IL-22但不产生IL-17、IFN-γ和IL-4的细胞。这种新型的T细胞亚群，被定义为Th22细胞，其既不同于传统Thl和Th2细胞，也不同于近年发现的Th17细胞，参与皮肤的自稳调节和病理状态，由此对AD的发病机制提出了新的挑战。本研究通过检测发现，AD患者外周血Th22较对照组明显升高，且与疾病严重程度呈正相关，进一步证实Th22细胞在AD发病机制中的作用。

 

Th22细胞的表型为CCR6+CCR4+CCR10+，关键转录因子是芳香烃受体(AHR)，主要分泌IL-22，还可分泌IL-l0、IL-13、IL-26、肿瘤坏死因子(TNF)-α等细胞因子。其功能主要是通过IL-22来实现的。体外实验研究发现，IL-23或IL-6均可诱导刺激IL-22的表达。在浆细胞样树突细胞刺激下，IL-6和TNF-α可以促进CD4+T初始细胞向Th22型细胞的分化。

 

IL-22最早由Dumoutier等命名为IL-10相关的T细胞衍生可诱导因子，由IL-9诱导小鼠T淋巴细胞瘤产生，其22%的氨基酸序列与IL-10同源。在人类体细胞中检测出该因子，因而命名为IL-22。IL-22与其受体结合导致Janus激酶(JAK)和Stat活化，尤其是Stat3传导途径的活化。

 

有研究证实Th22与特应性皮炎发生发展密切相关，其分泌的IL-22表达升高，且IL-22CD8+T细胞数与异位皮炎的严重程度相关。本研究结果显示，AD患者外周血Th22较对照组明显升高，与IL-22呈正相关，且与疾病严重程度呈正相关。我们推测，在AD的发病过程中，Th2型细胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-13依次刺激嗜酸粒细胞增加，使其释放出的IL-6促进CD4+T初始细胞向Th22型细胞分化，而Th22型细胞主要分泌IL-22，因此IL-22的表达增强。IL-22与受体结合后能激活传导通路中的信号转导因子，通过与靶基因DAN结合区域相结合而实现相应的生物学效应，参与AD的发病。本研究结果表明，AD患者外周血Th22细胞与IFN-γ、IL-4无相关，提示属于Th1细胞因子的IFN-γ和Th2细胞因子的IL-4与Th22细胞的分化无关，是独立于Th1和Th2的细胞亚群。

 

Th22细胞作为一个独立的新型辅助性T细胞具有特殊的表型和生物学效应。随着研究的深入，针对细胞因子的靶向治疗成为可能，为特应性皮炎的治疗提供理论依据。至于Th22究竟以什么方式参与特应性皮炎，其所分泌的细胞因子在整个细胞因子网络中处于什么环节，尚需要进一步的研究。

 

(郭晓兰，李秀娟，特应性皮炎患者外周血辅助性T细胞22的表达及意义[J]国际医药卫生导报2012年第18卷第l4期：2025-2026)

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