互联网药品信息服务资格证:
(粤)-非经营性-2018-0148
药房介绍
|
药品专题
|
药品目录
|
问答频道
|
全国门店
行业资讯
|
上市新药
|
慈善赠药
|
药师博客
|
其它用药
首 页
肿瘤科
肝病科
神经科
精神科
皮肤性病科
眼 科
风湿免疫科
心脑血管科
糖尿病科
泌尿生殖科
消化系统
更多
妇儿科
常备用药
医疗器械科
您现在的位置:
百济新特药房网首页
>>
皮肤性病科
>>
尖锐湿疣
>>
尖锐湿疣常识
尖锐湿疣确认主要依靠临床病毒DNA检测
来源: 百济药房药讯 作者:百济动态 浏览:
发布时间:2012/2/28 3:27:00
尖锐湿疣
(CA)是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的鳞状上皮增生性疣状病变,有80多种抗原型。外阴尖锐湿疣的发病率明显增高,已成为常见女性性传播疾病。潮湿的外阴皮肤易于HPV的生长:妊娠、
糖尿病
、影响细胞免疫功能的全身疾病时,尖锐湿疣生长迅速,且不易控制。HPV除可引起生殖道的尖锐湿疣外,还可能与生殖道
肿瘤
的癌前病变有关,尤其是HPV16、18型与
外阴癌
、
宫颈癌
的更为密切,已对妇女身心健康造成严重影响,应引起全社会足够的重视。
在卫生部所颁布的《尖锐湿疣的诊疗原则》里也没有“病毒与血液有关”的描述,所以一般诊断尖锐湿疣或检测是否有病毒,不必对血液进行检测,临床证明血液化验的阳性或阴性结果并不能准确反映病毒存在的实际情况。尖锐湿疣的确切诊断主要还是要依靠临床病毒DNA检测、醋酸白实验或病理学检查来确诊。下面由
百济药师
为你一一详细介绍
一、醋酸白试验
用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟,病灶部位变白稍隆起,肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果,HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同,只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高,它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示,醋酸白试验并不是特异试验,且假阳性较常见。
二、免疫组织学检查
常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法(即PAP),显示湿疣内的病毒蛋白,以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时,尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。
三、组织化学检查
取少量病损组织制成涂片,用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原,则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)方法中,核可被染成红色。此法特异性强且较迅速,对诊断有帮助。
四、病理检查
主要为角化不全,棘层高度肥厚,乳头瘤样增生,表皮突增厚,延长,其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似癌变。但细胞排列规则,且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大,胞浆着色淡、中央有大而圆,深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣,表皮极度向下生长,代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混,故须多次活检。若有缓慢发展之倾向,则为一种低度恶变的过程,即所谓疣状癌。
五、基因诊断
迄今,HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测,主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点,为HPV检测开辟了新途径。
(一)标本的采集及处理
1.标本的采集和预处理:用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时,将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS离心(3000g,10min)洗涤2次,沉积细胞重悬于1mlPBS中,取0.5ml细胞悬液抽提DNA。
2.标本核酸的提取:按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/L Tris-HCl,pH 7.4,10mmol/L EDTA,150mmol/L NaCl,0.4%SDS,1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(1:1),氯仿/异戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10体积3mol/L NaAc(pH 5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃ 2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl,pH 8.0,1.0mmol/L EDTA)溶解DNA,37℃温育30min。
(二)PCR扩增
1. 引物设计和合成:HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L),每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1,该引物与HPV 6、11、16、18及33型有互补序列,也可扩增其它型HPV。
Manos等设计的HPVL1通用引物
MY11:GCMCAGGGWCATAAYAATGG
MY09:CGTCCMARRGGAWACTGATC
2.PCR反应试剂:Taq DNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/L dNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10×PCR缓冲液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5),100μmol/L MY11和MY09贮备液,灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。
3.PCR扩增方法和程序:以100μl PCR反应液''用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。
(1)实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。
(2)各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。
(3)加入80-100μl石蜡油,在台式离心机上快速离心数秒钟,使各反应试剂收集于油层下。目前,PCR试剂已商品化,反应体积为25μl。使用时只加入标本DNA即可。
(4)将反应管置PCR扩增仪上,循环参数为95℃ 30s,55℃ 40s,72℃ 50s循环35次,最后72℃延伸5min。
4.每次试验应设阳性及阴性对照。以载有HPV的重组质粒(每反应为100pg)或含有HPV的细胞系(如Caski、HeLa)DNA为阳性对照,以无HPV的人细胞系DNA为阴性对照。
(三)扩增产物的检测和分析
1. 凝胶电泳:扩增反应结束后,取出反应管,冷却至室温,取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳,溴化乙锭染色,紫外分析仪下分析结果,分子量约为450bp处出现明显的DNA带。
2. 核酸杂交:如果凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时,可用标记的公用混合探针和(或)型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。
按照标准方法制32P ATP标记的寡核苷酸探针,需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h,随后于30-55℃下用洗涤液(2×SSC、0.1%SDS)迅速冲洗杂交膜,除去多余探针。然后进行洗膜,其条件依所用探针而异:公用混合探针,55℃洗膜10min;MY12、MY13及MY16探针,56-57℃下10 min,并换液重洗1次;MY14及WD74探针,58-59℃下10min,亦换液重洗1次。
用PCR方法检测HPV比核酸杂交方法优越。其敏感性高,GP-PCR方法以凝胶电泳直接分析结果,可检出标本中200个拷贝的HPV DNA,若以核酸杂交检测PCR产物,敏感性提高,能检出10个拷贝的HPV DNA。
鉴于PCR技术的高度敏感性,以生殖道脱落细胞为检材足以满足试验要求,避免了活检取材、研磨组织繁杂操作。一般情况下,PCR扩增产物经凝胶电泳,观察产生的DNA可直接作出诊断。因此,PCR技术检测HPV实验周期短、简便快速。
分享到:
尖锐湿疣皮损区的免疫状态与免疫治疗…
咪喹莫特乳膏可以每天使用吗?
咪喹莫特乳膏治疗尖锐湿疣效果怎么样…
国产5%咪喹莫特乳膏治疗尖锐湿疣五年…
如何自查尖锐湿疣?
胸腺五肽治疗复发性尖锐湿疣临床疗效…
明欣利迪详细说明书
尖锐湿疣潜伏期有多长?
尖锐湿疣常识
什么原因引起尖锐湿疣?
TAG:
尖锐湿疣
相关药品
温馨提示
【
我要挑错
】【
关闭窗口
】
皮肤性病科导航
皮肤病新闻
新药动态
研究进展
皮肤病的诊断
银屑病[牛皮癣]
白癜风
尖锐湿疣
疱疹
脱发
痤疮[青春痘]
皮炎
荨麻疹
红斑狼疮
灰指甲
疤痕[瘢痕]
色斑
鱼鳞病
艾滋病
生殖器念珠菌病
淋病
细菌感染
真菌感染
皮肤性病药品
最新相关文章
热门药品
苦参疱疹酊
怡万之
美浮特皮肤抗菌液
百消丹
克毒星
安浮特克
复方珍珠暗疮片
海克洛
纳清舒缓霜
克逗
丁克
固肾生发丸
芭克硅胶软膏
可乐必妥
雅漾日间隔离乳SPF30PA+XxXXxX
美皮护
治糜康栓
仙琚
迪银
脾氨肽口服溶液
逸豆消痤丸
捷抚
金毓婷
丁克
彼康王
皮肤性病科药品
银屑病[牛皮癣]
|
白癜风
|
尖锐湿疣
|
疱疹
|
脱发
|
痤疮[青春痘]
|
皮炎
|
荨麻疹
|
红斑狼疮
|
灰指甲
|
疤痕[瘢痕]
|
色斑
|
艾滋病
|
淋病
|
网站资讯
-
药房介绍
|
连锁门店分布
|
人才招聘
|
联系我们
|
网站地图
便民帮助
-
常见问题
|
服务指南
|
药学服务
|
顾客意见
|
顾客投诉
|
专科服务
|
寻医问药
|
药师窗口
专科分类服务
-
肿瘤科
|
肝病科
|
神经科
|
精神科
|
皮肤性病科
|
眼 科
|
风湿免疫科
|
心血管科
|
糖尿病科
|
其他科用药
药品服务
-
肿瘤科药品
|
精神科药品
|
肝病科药品
|
眼科药品
|
皮肤性病科药品
|
神经科药品
|
风湿免疫科药品
百济药房资质
-
企业法人营业执照
|
互联网药品信息服务资格证
503
180
皮肤性病科
|尖锐湿疣|
尖锐湿疣常识