导读:环孢素滴眼液为华北制药集团新药研究开发有限公司独立创新开发的、填补全球空白的独家产品,是目前角膜移植后唯一的眼用抗排斥特效药物和制剂创新品种,属于国家二类新药。环孢素滴眼液为淡黄色的澄明油状液体,用于预防和治疗眼角膜移植术后的免疫排斥反应。
本文参考环抱素口服液的测定方法,采用HPLc外标法,用流动相萃取样品,离心分离后进行含量测定。该方法操作简便,快速,准确,精密度高,可用于环抱素滴眼液的含量测定。
1仪器与试药
岛津高效液相色谱仪(LC一10ATvp泵,SPD一10AMvP二极管阵列检测器;CLASS一VP数据工作站);环抱素对照品;环抱素原料(杭州中美华东制药有限公、司);乙睛为色谱纯,其余均为分析纯。环抱素滴眼液。
2实验方法
2.1色谱条件色谱柱:Vp一ons(150mmx4.6mm,5林m)流动相:乙睛一水(80,20);流速1mL•min-1;检测波长214nm;进样量20卜L:柱温70℃。
2.2对照品溶液的制备精密称取环抱素对照品0.10109,置100mL量瓶中,加流动相溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得(每1mL含环抱素1.olomg)。
2.3可行性及系统适应性试验:按处方制备不含环抱素的阴性样品,取样品和阴性样品各1,00mL,分别加流动相9.00mL稀释、萃取,充分振摇后, 3000:•min-1离心10min,取上清液20林L进样,按上述色谱条件测定比较了样品、对照品和阴性样品的色谱图,结果在此条件下能达到环抱素与其他组分分离,R二2.8l,理论塔板数按环饱素峰计为964。
2.4线性关系考察 精密量取对照品溶液0.2,1,3,6,8,10mL分别置于10mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。采用20mL定量环进样,每个浓度重复进样3次,以环抱素色谱峰面积平均值A对其浓度C(μg•mL-1)回归,得回归方程: A= -2.236+3.503x105Cr=0.9999。结果表明环抱素浓度在20.2一1010μg•mL-1范围内,与其峰面积呈良好的线性关系。
百济药师温馨提醒:本实验采用二极管阵列检测器,对峰纯度进行了检测,以色谱图中保留时间5.45min处的光谱图为标准(检测波长214nm),将色谱峰中的全部光谱图与之相比较,计算出总峰纯度为0.99997,进样约100次后,总峰纯度为0.99996,证明本法专属可靠。
参考文献:陈洁等《高效液相色谱法测定环孢素滴眼液中环孢素的含量》,《药物分析杂志》,2006年第3期