方法名称:再造生血片-补骨脂素、异补骨脂素的测定-高效液相色谱法
应用范围:本方法采用高效液相色谱法测定再造生血片中补骨脂素、异补骨脂素的含量。
本方法适用于中成药再造生血片。
方法原理: 本品加甲醇超声处理,放冷,补重,摇匀,滤过,续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离,用紫外吸收检测器,于波长247nm处检测补骨脂素、异补骨脂素的吸收值,计算出其含量。
试剂:
1. 甲醇
2. 乙腈
3. 0.125%磷酸溶液
仪器设备:
1 仪器
1.1 高效液相色谱仪
1.2 色谱柱
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,理论塔板数按补骨脂素计算应不低于3000。
1.3 紫外吸收检测器
2色谱条件
2.1流动相:乙腈 0.125%磷酸溶液=30 70
2.2检测波长:247nm
2.3柱温:室温
试样制备:
1. 称取供试品
取本品20片,除去包衣,精密称定,研细,取约1g,精密称定,为供试品。
2. 对照品溶液的制备
精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量,加甲醇制成每1mL各含16mg的混合溶液。
3. 供试品溶液的制备
取本品20片,除去包衣,精密称定,研细,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率25kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液1mL,置10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。
操作步骤:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5mL,注入高效液相色谱仪,用紫外吸收检测器于波长247nm处测定补骨脂素(C11H6O3)、异补骨脂素(C11H6O3)的峰面积,计算出其含量。
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